材料与仪器
乳腺干细胞
D920细胞或等同物 H14培养基 DMEM 0.5FB EDTA:DMEM 含有0.5% FBS和0.1mmol EDTA 不含血清的DMEM Matrigel
抗鼠igG磁珠 MACS柱 含冰的冰盒
步骤
1. 在I型胶原包被的培养瓶中用H14培养基培养D920细胞至70%〜80%汇合。
2. 消化细胞，用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至l×107个细胞/ml。
3. 加入1:50稀释的抗ESA抗体，置冰上孵育30min。
4. 用10ml无血清的DMEM洗涤一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至1×107个细胞/ml。
5. 按照制造商推荐的浓度，加入抗鼠IgG磁珠，置冰上孵育30min。
6. 用10ml无血清的DMEM洗涤一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重悬至1×107个细胞/ml。
7. 将细胞悬液加入到合适体积的MACS柱中。
8. 用3倍细胞悬液体积的DMEN/0.5FB/EDTA培养基洗涤MACS柱。
9. 从磁铁上取下柱子，用H14培养基洗脱。
10. 将基底膜基质（Matrigel)置于冰上，在24孔板中每孔加入5μL包被。
11. 置37℃，10 min使之聚合。
12. 与此同时，用300μ1冰浴的Matrigel重悬1×103〜1×104的D920细胞。
13. 加入到包被的24孔板中，置37℃,10 min使之聚合。
14. 加入H14培养基，每2天换液。
苏州奎克泰生物为韩国NanoEnTek中国区独家总授权，JuLI系列活细胞成像仪深受赞誉。JuLI Br是一款明场的实时活细胞成像分析仪，实时观察/拍摄/记录细胞生长的全周期。镜头与底座分开，由数据线连接进行数据传输和电源提供；镜头可以放置在标准培养箱中，无需将样本拿出培养箱就可实现实时细胞生长状态观察、监测、记录、分析。通过设置拍摄时长和拍摄时间间隔可以通过视频和照片的方式将细胞全生长过程记录下来，避免错过关键时刻，无需全程守在培养箱旁。任何变化都可以通过培养箱外的底座观察到，底座配有触控屏，可以实时查看细胞状态和操作以获得细胞数量、存活率、浓度、融合度、细胞生长曲线等结果。这一款的计数功能是选配。Br的底座还可以同时连接两个镜头，实现对比实验的实时对照。 JuLI FL是一款带荧光（GFP/RFP）的实时活细胞影像分析仪，与JuLI Br外观一样，Br有的功能FL都具备，且计数功能是FL标配，无需选配。除了Br能实现的细胞计数、监测、拍照、形成视频、融合度、生长曲线等功能，FL还可以测定转染效率等级（GFP/RFP表达水平）。FL同样可以实现一个底座同时连接两个镜头，可搭配一个GFP镜头和一个RFP镜头，就能实现双色荧光+明场。 JuLI Stage是一款全自动活细胞荧光监控系统，具有三色荧光。与Br/FL一样可置于培养箱内实时观察/监测/拍摄细胞生长情况、计数细胞、计算细胞融合度、生成动态影像及生长曲线。Stage的载物台是可以移动的，适用6到384孔板、细胞培养皿、细胞培养瓶及各种玻片等培养耗材。能够实现自动扫描、自动对焦和图像拼接功能。Stage还自配4X、10X和20X三个可替换物镜，可以根据实验需要选择合适的物镜倍数。
转载：
http://pro.biomart.cn/lab-web/method/316re3mgo33vi.html
