慢病毒转染是一种常见的，在一种细胞系中稳定敲除/表达某种基因的方式。稳转株全称是稳定表达细胞株，通常是指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系，通过慢病毒感染能够将外源 DNA 克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，从而筛选得到可稳定表达目的蛋白或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

材料与仪器

慢病毒及病毒感染增强液、移液枪、枪头、Ep 管、细胞培养孔板、无血清 DMEM，完全培养基、废液缸、口罩、手套。

操作步骤

1. 准备：在转染之前将细胞接种于适当的孔板之中，使转染时细胞的汇合度约为 20%~30%，培养 16~24 h。

2. 转染：在细胞对数增长期向孔板中加入适当体积的病毒及转染试剂，先用无血清培养基培养 8 h~12 h 后，换成含血清培养基培养。

    具体加入量可参考以下表格：

   可将病毒及转染试剂按照适当比例加入到完全培基中，再分别加入到各个孔中。每孔的液体体积为：

3. 转染后 72 h 可适当对细胞换液，保持细胞活性。

4. 可通过观察 GFP 荧光情况判断转染效率，若细胞带有嘌呤霉素抗性基因，可使用嘌呤霉素处理，筛选稳转株。

5. 注意事项：GFP 荧光只能说明质粒被转入细胞，具体的过表达/敲低效果需要以 WB 的结果为准。

几个名词的解释：

MOI： 复感染指数，指病毒对细胞的感染能力。通常把某株细胞有 80% 被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的 MOI。MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目。

TU/ml： 「TU」为「Transducing-Units」的缩写，中文为转导单位，表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。TU/ml 指的是每毫升慢病毒液中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。

注意事项

1. 操作时建议使用生物安全柜，若使用普通超净台，请不要打开排风机。

2. 操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅，废弃物请专门处理或密封后高温高压灭菌。 

3. 对于不分裂的细胞，应适当提高铺板密度。

4. 注意支原体污染。

苏州奎克泰生物为韩国NanoEnTek中国区独家总授权，JuLI系列活细胞成像仪深受赞誉。JuLI Br是一款明场的实时活细胞成像分析仪，实时观察/拍摄/记录细胞生长的全周期。镜头与底座分开，由数据线连接进行数据传输和电源提供；镜头可以放置在标准培养箱中，无需将样本拿出培养箱就可实现实时细胞生长状态观察、监测、记录、分析。通过设置拍摄时长和拍摄时间间隔可以通过视频和照片的方式将细胞全生长过程记录下来，避免错过关键时刻，无需全程守在培养箱旁。任何变化都可以通过培养箱外的底座观察到，底座配有触控屏，可以实时查看细胞状态和操作以获得细胞数量、存活率、浓度、融合度、细胞生长曲线等结果。这一款的计数功能是选配。Br的底座还可以同时连接两个镜头，实现对比实验的实时对照。 JuLI FL是一款带荧光（GFP/RFP）的实时活细胞影像分析仪，与JuLI Br外观一样，Br有的功能FL都具备，且计数功能是FL标配，无需选配。除了Br能实现的细胞计数、监测、拍照、形成视频、融合度、生长曲线等功能，FL还可以测定转染效率等级（GFP/RFP表达水平）。FL同样可以实现一个底座同时连接两个镜头，可搭配一个GFP镜头和一个RFP镜头，就能实现双色荧光+明场。 JuLI Stage是一款全自动活细胞荧光监控系统，具有三色荧光。与Br/FL一样可置于培养箱内实时观察/监测/拍摄细胞生长情况、计数细胞、计算细胞融合度、生成动态影像及生长曲线。Stage的载物台是可以移动的，适用6到384孔板、细胞培养皿、细胞培养瓶及各种玻片等培养耗材。能够实现自动扫描、自动对焦和图像拼接功能。Stage还自配4X、10X和20X三个可替换物镜，可以根据实验需要选择合适的物镜倍数。

转载：

http://pro.biomart.cn/lab-web/method/343d6h0go4qju.html