实验原理： 

在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。 

实验步骤：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

注意事项：

1.取细胞爬片时，动作应轻柔，防止将细胞爬片夹碎，影响实验进程。

2.种细胞过程中，要注意将细胞轻柔混匀，“八”字或者“十”字形摇晃，防止细胞局部生长过密。

活细胞影像分析仪，实时观察/拍摄/记录细胞生长的全周期。镜头与底座分开，由一根扁平的数据线连接，进行数据传输和电源提供；镜头可以放置在标准培养箱中，无需将培养器皿拿出培养箱就可实现实时细胞生长状态观察、监测、记录、分析。通过设置拍摄时长和拍摄时间间隔可以通过视频和照片的方式将细胞全生长过程记录下来，这样就可以避免错过观察的关键时刻，也无需全程守在培养箱旁随时观察细胞状态。任何变化都可以通过培养箱外的底座观察到，底座配有触控屏，可以实时查看细胞状态和操作以获得细胞数量、存活率、浓度、融合度、细胞生长曲线等结果。这一款的计数功能是选配。Br的底座还可以同时连接两个镜头，实现对比实验的实时对照。

JuLI FL是一款带荧光（GFP/RFP）的实时活细胞影像分析仪，与JuLI Br外观一样，Br有的功能FL都具备，且计数功能是FL标配，无需选配。除了Br能实现的细胞计数、监测、拍照、形成视频、融合度、生长曲线等功能，FL还可以测定转染效率等级（GFP/RFP表达水平）。FL同样可以实现一个底座同时连接两个镜头，可搭配一个GFP镜头和一个RFP镜头，就能实现双色荧光+明场。

JuLI Stage是一款全自动活细胞荧光监控系统，具有三色荧光。与Br/FL一样可置于培养箱内实时观察/监测/拍摄细胞生长情况、计数细胞、计算细胞融合度、生成动态影像及生长曲线。Stage的载物台是可以移动的，适用6到384孔板、细胞培养皿、细胞培养瓶及各种玻片等培养耗材。能够实现自动扫描、自动对焦和图像拼接功能。Stage还自配4X、10X和20X三个可替换物镜，可以根据实验需要选择合适的物镜倍数。

转载：

http://www.biomart.cn/experiment/130.htm