血球计数板：

我们一般用的是四各角落的大正方形，每个正方形有 16 个小格，长为1mm ，宽为1mm ，高为 0.1 mm，每个大正方形之体积为 1 mm²×0.1 mm=0.0001 mL。计算方法：（4个大正方形内之细胞数目之和×稀释倍数× 104）/4=每 mL 悬液中的细胞数目。

步骤：

1. 血球计数板用酒精喷洒后吸水纸擦干备用；

2. 细胞悬液充分混匀后取10ul加入至计数板的上样口，尽量铺满整个网格，尽量不要溢出、过少或者有气泡；（如果需要做细胞存活率的话应加入适量的Trypan blue染色，但计算时要乘以相应的稀释倍数），（关于细胞悬液的制备方法可以参考我的上篇文章）。

3. 细胞计数：显微镜下计数，计算四个大方格中的细胞数，注意2 个以上细胞组成的细胞团按一个细胞计算，压线的细胞记上不记下，记左不计右（防止细胞被重复计数）。

4. 计算：带入公式：（4个大正方形内之细胞数目之和×稀释倍数× 104）/4=每 mL悬液中的细胞数目。

5. 举例：96孔板，需要做40孔，每孔100ul,每个孔细胞数为3000个。

假设四个正方形细胞计数为：55，60，51，49

计算1ml悬液中的细胞数：（55+60+51+49）/4×104=54×104

计算目标细胞数：3000×40=12×104个

计算需要铺板用的总体积：100×40=4ml

则我需要取的细胞悬液为：0.222ml,需要的培养基的量为：3.778ml，铺板每孔+0.1ml。

苏州奎克泰生物为韩国NanoEnTek中国区独家总授权，EVE是一台基础款的自动细胞计数仪，核心就是结果准确、性能稳定。（对于自动细胞计数仪，最主要的需求就是计数准确、设备稳定运行，EVE就能提供非常可靠、稳定的计数结果。）①可以准确显示总细胞数、活细胞数、死细胞数、细胞存活率、细胞大小分布直方图；②EVE还具有独特的细胞大小阀门功能，能对所需要的细胞大小进行筛选，排除小体积的碎片，和不想要的尺寸区间；③成团细胞科学计数；④自带触控屏一体机，无需另外配置显示屏。（Countstar需要自配显示屏）⑤计数板的制造工艺，是一体成型的，相较于国内焊接工艺（会存在缝隙）会更准确一些。有稀释计算器功能。PLUS是EVE的升级款，在检测时间和性能上做了升级，依然保持了非常高的准确度/稳定性。增加了自动聚焦的功能，检测速度进行了提升，手动聚焦模式下1秒即可完成计数，自动聚焦会在10秒内显示结果。PLUS的机型设计也进行了改善-更美观，在运行灵敏度上也比EVE有所提升。HT和HT FL是EVE系列中的高通量自动细胞计数仪，适合工业生产或样本测量数量要求高的客户。HT可实现在3分钟内一次性计数48个样本，大大提高了计数效率，节约时间和人工成本。在同一块计数板里还可以不同细胞系的计数，提供多测试结果，更加高效。

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