人类多能干细胞（hPSC）在再生医学和药物开发方面具有巨大的应用潜力。在之前的研究中，hPSC通常在2D条件下培养。然而，这种培养方式往往高度依赖细胞本身，同时2D培养存在占用空间大、细胞扩增耗时多等缺点。因此，高质量干细胞难以大量获得，从而阻碍了hPSCs在临床治疗中的应用。

目前已经建立的以聚集体形式扩增的方法由于其不易受动物源性生物材料和基质影响以及更易提取细胞的特点已被广泛采用。然而，在3D培养条件下，hPSC的过度聚集阻碍了细胞的分化过程。硫酸葡聚糖（DS）作为一种化学试剂可以防止hPSC在三维悬浮培养过程中过度粘附形成较大的聚集体，而不影响细胞活力和细胞多能性。然而，这种现象背后的信号传导和分子机制仍然不清楚。

本研究采用细胞聚集培养法，在悬浮培养系统中分离大、小聚集体，通过mRNA序列分析、qRT-PCR验证、集落形成试验和干扰试验，研究DS的潜在机制和下游靶基因。

使用JuLI™ Stage活细胞成像分析系统观察在shNT和shRNA-b不同处理下，3D细胞的聚集程度。结果图表明第五天shRNA-b处理组表现出更明显的细胞聚集。