材料与仪器
【材料】细胞悬液,化合物溶液、CCK-8 试剂、完全培养基、PBS、0.25% Trypsin-EDTA
【仪器,耗材】96 孔板,二氧化碳培养箱,检测波长 450-490nm酶标仪
步骤
1. 根据具体细胞类型确定其在 96 孔板种植密度,以对照组细胞密度至检测时达到 70%-90% 为参照,每组设置 3-6 个复孔,孔板边缘空不用,加入与培养基等体积的无菌 PBS 溶液;
2. 每孔加入培养基体积 1/10 的CCK-8 溶液。若起始的培养体积为 200 微升,则需加入 20 微升 CCK-8 溶液,其它情况以此类推。同时以加了相同体积细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有细胞的孔作为空白对照。若所用药物会干扰检测结果,则选加入等体积细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但无细胞的孔作为空白对照(注意不可产生气泡);
3. 在细胞培养箱内继续孵育 2-4 小时,建议选取 2、3、4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验;
4. 在 450 nm 测定吸光度。如无 450 nm 滤光片,可以使用 420-480 nm 的滤光片。可以使用大于 600 nm 的波长,例如 650 nm,作为参考波长进行双波长测定。
转载:
http://pro.biomart.cn/lab-web/method/316nsasgo4ooh.html