原理

原代提取目的细胞会混杂着大量的其它细胞，通过不同生物酶的梯度消化、差速贴壁等能够得到纯

度较高的目的细胞群。胶原酶是一种从细菌中提取的酶，对胶原消化作用强，适用于纤维组织及上皮组织的消化，其中胶原酶 I 和分散酶 II 消化结肠组织时可以使细胞间质的脯氨酸多肽水解，达到分散细胞，而不影响上皮细胞的效果，采用相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞可获得纯度较高的结肠上皮细胞。

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材料与仪器

含有双抗的 DMEM 培养基、5 g/L 胰蛋白酶，Buffer 溶液（5% RPMI1640 + 5% FBS + 10mM HEPES），消化液（DMEM 培养基溶解胶原酶 I 浓度为 0.1%，分散酶 II 浓度为 0.3%）

无菌剪刀、无菌镊子、100 μm 细胞过滤器、细胞培养瓶、细胞培养板；

步骤

1. C57BL/6 小鼠颈椎脱臼处死，喷适量酒精，滴加适量 Buffer 快速分离结肠；

2. 沿肠系膜剪开，DMEM 培养基清洗去除肠腔内容物；

3. 无菌剪刀将结肠组织剪成 1mm3 左右碎片；

4. 10 mL 0.1% 胶原酶 I 和 3% 分散酶 II 消化组织，37℃，摇床消化 25 min；

5. 吹打混匀，100 μm 细胞过滤器过滤，收集上清；

6. 相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞；

7. 加入 1 mL 培养基重悬细胞，接种于培养瓶完全培养基中，37℃，5% CO2 细胞培养箱中培养；

8. 细胞长至培养瓶 80-90% 后用 5 g/L 的胰酶消化液消化，接种于细胞培养板。

奎克泰生物的JuLI FL是一款带荧光（GFP/RFP）的实时活细胞成像分析仪，实时观察/拍摄/记录细胞生长的全周期。镜头与底座为分离式，镜头可以放置在标准培养箱中，无需将样本拿出培养箱就可实现实时细胞生长状态观察、监测、记录、分析。标配细胞计数功能，除了细胞计数、监测、拍照、形成视频、融合度、生长曲线等基础功能，还可以测定转染效率等级（GFP/RFP表达水平）。JuLI FL可以实现一个底座同时连接两个镜头，可搭配一个GFP镜头和一个RFP镜头，就能实现双色荧光+明场。

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