材料与仪器

PBS 胰酶溶液

MEF 滋养板 巴斯德吸管 ES 生长培养基

步骤

1. 准备下列试剂和材料：

• 60 mm MEF 滋养板（接种不能超过 7 天）

• 带棉塞无菌巴斯德吸管

• 无 Ca²⁺ 和 Mg²⁺ PBS

• ES 生长培养基

• 胰酶溶液

2. PBS 冲洗 ES 细胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆盖培养皿底（2 ml/p60） 

3. 37℃ 孵育 5 分钟左右，至细胞脱落。

4. 巴斯德吸管轻轻吹吸胰酶处理细胞 4~6 次，分散 ES 细胞。分散的细胞，包括单细胞和小的细胞团，转移至装有 2 ml 预热（37℃）ES 生长培养基的 15 ml 离心管。

5. 离心收集细胞。吸掉上清，留约两倍于细胞沉淀的体积。轻弹离心管悬浮细胞。加 10 ml ES 生长培养基，吹吸至悬液均匀。

6. 计数细胞。由于 ES 细胞较 MEF 细胞小，呈圆形，二者很容易区分。 

7. ES 细胞接种 60 mm MEF 滋养板。吸掉 MEF 滋养细胞培养基，加入悬于 5 ml ES 生长培养基的 ES 细胞。

8. 每天换一次液，加 5 ml ES 生长培养基。 

苏州奎克泰生物为韩国NanoEnTek中国区独家总授权，EVE是一台基础款的自动细胞计数仪，核心就是结果准确、性能稳定。（对于自动细胞计数仪，最主要的需求就是计数准确、设备稳定运行，EVE就能提供非常可靠、稳定的计数结果。）①可以准确显示总细胞数、活细胞数、死细胞数、细胞存活率、细胞大小分布直方图；②EVE还具有独特的细胞大小阀门功能，能对所需要的细胞大小进行筛选，排除小体积的碎片，和不想要的尺寸区间；③成团细胞科学计数；④自带触控屏一体机，无需另外配置显示屏。（Countstar需要自配显示屏）⑤计数板的制造工艺，是一体成型的，相较于国内焊接工艺（会存在缝隙）会更准确一些。有稀释计算器功能。PLUS是EVE的升级款，在检测时间和性能上做了升级，依然保持了非常高的准确度/稳定性。增加了自动聚焦的功能，检测速度进行了提升，手动聚焦模式下1秒即可完成计数，自动聚焦会在10秒内显示结果。PLUS的机型设计也进行了改善-更美观，在运行灵敏度上也比EVE有所提升。HT和HT FL是EVE系列中的高通量自动细胞计数仪，适合工业生产或样本测量数量要求高的客户。HT可实现在3分钟内一次性计数48个样本，大大提高了计数效率，节约时间和人工成本。在同一块计数板里还可以不同细胞系的计数，提供多测试结果，更加高效。

转载：

http://pro.biomart.cn/lab-web/method/316rdsogo2plu.html