在体外条件下对骨骼肌细胞进行培养的实操分享

原理

骨骼肌细胞的培养实验的基本原理是在体外培养时，在培养基中加入胎牛血清并将细胞接种于明胶上，可使肌肉组织中的骨骼肌单核前体细胞在发生增殖的基础上，进一步向成熟骨骼肌细胞发生分化，即细胞间进行大量的融合、细胞内有横纹形成、细胞可发生自发性的收缩等，由此可得到大量的骨骼肌细胞。

材料与仪器

器材：

① 新生 1～2d 的大鼠

② 培养瓶

③ 吸管和胶帽

④ 培养皿

⑤ 解剖剪

⑥ 眼科剪

⑦ 眼科镊

⑧ 无菌的纱网

⑨ 离心机

⑩ 倒置显微镜

⑪ 超净工作台

⑫ CO₂ 培养箱

⑬ 离心管

试剂：

① D-Hanks 液

② DMEM 培养基（含 10% 胎牛血清）

③ 胶原酶液

④ 0.01% 明胶等。

步骤

骨骼肌细胞的培养实验基本过程可分为以下几步：

一、取材

1. 取新生 1～2 d 的大鼠 1 只，采用脱颈椎法将其处死。

2. 用 70% 的乙醇擦拭大鼠全身 3 遍。

3. 在无菌条件下，用解剖剪剪开大腿皮肤，剥去皮毛。

4. 用眼科剪取下大腿肌肉，将其置于盛有 D-Hanks 液的培养皿中。

5. 除去肌肉组织上粘连的脂肪组织，并将肌肉中的骨骼剔除。

6. 将上述肌肉组织用 D-Hanks 液再反复清洗 3 遍，然后置于含用培养基的培养皿中。 

二、消化

1. 用眼科剪将肌肉组织剪成大小为 1 mm³ 的小块，放入盛有胶原酶液（2000 U/ml）的锥形瓶中，于 37 ℃ 消化 24 h 左右。

2. 吸管用力吹打消化后的肌肉组织块，用无菌的沙网将吹打后残余的组织碎块加以滤过，收集细胞悬液于 10 ml 离心管中。 

3. 800 r/min 离心 5 min，弃上清。

4. 加入含 10% 胎牛血清的培养基，吹打沉淀的细胞，制备细胞悬液。

5. 将细胞接种于覆盖有 0.01% 明胶的培养皿中，接种量可增大到 2 x 10⁶ 个细胞/皿。

6. 将培养皿置于 37 ℃ 培养箱中进行培养，4～5 d 后即可得到大量的骨骼肌细胞。

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转载：

http://pro.biomart.cn/lab-web/method/31hnehogo3rsd.html