混合淋巴细胞增殖实验也称混合淋巴细胞培养（MLC）或称混合淋巴细胞反应（MLR），常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。

材料与仪器

器材：细胞培养瓶、培养板、吸管等、CO2 细胞培养箱、超净台。

试剂：

① 10％FCS-RPMI 1640 培养基 ;

② 细胞 DCs 细胞、反应细胞、外周血单个核细胞。

③ 3 H-TdR 工作液

步骤

混合淋巴细胞增殖实验的基本过程可分为如下几步：

一、刺激细胞（DCs）的制备

1. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞

2. 以 10％ FCS-RPMI 1640 悬浮细胞置培养瓶中，37℃、5％ CO2 培养 2 小时，轻轻翻过培养瓶，弃掉培养上清，将非贴壁细胞弃掉，即得贴壁的单核细胞

3. 补加 10％ FCS-RPMI 1640 同时加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF，500 IU/ml 的 IL-4，培养至第 7 天，收集悬浮细胞，即为 DCs

4. 刺激细胞经 25 μg/ml 的丝裂霉素 C 或 2000 rad y-射线照射处理使刺激细胞失去增殖能力。

二、反应细胞的制备

1. 取健康人外周血制备单核细胞，PBS 洗 3 次后，37℃、5％ CO2 贴壁 2 小时，收集悬浮细胞，作为反应细胞

2. 以 RPMI 1640 培养液重悬，调整细胞浓度至 1x106 个/ml。

三、混合淋巴细胞反应

1. 将刺激细胞调整浓度分别为 1x106、5x105、2x10、1x105、5x104 个/ml， 10％FCS-RPMI 1640 培养于 96 孔培养板中，每浓度设立 3 孔，100μL/孔

2. 将反应细胞浓度按 1x106 个/ml 每孔分别加入上述各孔中，100μl/孔

3. 同时设立刺激细胞对照组（不同浓度刺激细胞 100μl＋培养液 100μl）和反应细胞对照组（反应细胞 100μl＋培养液 100μl） 

4. 37℃，5％ CO2 培养 5 天后，3 H-TdR 掺入率检测反应细胞的增殖水平。

步骤

1. 实验中注意无菌操作

2. 如作单向混合淋巴细胞实验，则刺激细胞接受照射剂量要准确，使细胞暂时存活，但失去增殖的能力。 

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转载：

http://pro.biomart.cn/lab-web/method/31gq58ago3p47.html